Микроскопическая диагностика сифилиса
Для подтверждения диагноза «сифилис» необходимо ориентироваться не только на клинические данные – объективные симптомы болезни – наличие характерного шанкра в первичном периоде, пятнистых высыпаний во вторичном или гуммозной и бугорковой сыпи при позднем сифилисе. С этой целью используются методы лабораторной диагностики сифилиса, наиболее часто применяемые из которых – микроскопия, культуральное исследование материала от пациента, серологические пробы и гистологическое исследование образцов биологических тканей. В данной статье будет рассмотрена микроскопическая диагностика сифилиса.
Микроорганизмы – спирохеты – в организме больного человека находятся в межтканевом пространстве, между соединительнотканными волокнами, окружают русла лимфатических и кровеносных сосудов. Чтобы точно определить наличие возбудителя сифилиса, необходимо забрать материал для исследования именно оттуда. Конечно, забирать материал имеет смысл только элементов сыпи (в особенности с эрозий и язвочек), с поверхности шанкров и со слизистых оболочек гениталий, ротовой полости и прямой кишки. Кроме того, существуют и альтернативные способы, например, пункция лимфатических узлов.
Как правильно забрать материал для исследования?
Чтобы мазок на сифилис получился удачным, перед взятием диагностического материала с поверхности язвы или эрозии нужно убрать все лишние загрязнения с помощью марлевого тампона, пропитанного физиологическим раствором. После подсушивания поверхности элемента на его поверхность начинает просачиваться жидкость, в большом количестве содержащая возбудителя болезни. Ускорить процесс можно с помощью мягкого надавливания на элемент (разумеется, в резиновых перчатках). После этого с помощью предметного стекла изготовляется мазок на сифилис, который после обработки микроскопируется. Чтобы получить материал из неподверженных эрозии высыпаний, используется метод поскабливания их скальпелем или стерильной бритвой.
Темнопольная микроскопия
Одним из наиболее перспективных и дешевых методов диагностики сифилиса является микроскопия трепонем в темном поле. При этом препарат не высушивается, исследование проводят в капле обычного изотонического раствора соли. На предметное стекло направляют узким пучком яркий свет (его получают с помощью специального прибора – конденсатора). Свет при этом падает на препарат практически сбоку, в объективе при этом видно темное поле. Однако микробные тела, находящиеся в препарате, преломляют и отражают свет – в результате возникает крайне интересный оптический эффект (основанный на феномене Тиндаля) – трепонемы начинают выглядеть как светящиеся подвижные спирали с несколькими завитками.
Исследование по методу Романовскому – Гимзе
Данный способ (в отличие от окраски по Граму) позволяет получить хорошо различимое изображение микробного тела при микроскопии – это один из наиболее достоверных методов диагностики сифилиса. Исследование проводится следующим образом: полученный мазок на сифилис фиксируют в реактиве Никифорова (смесь равных долей этилового спирта и эфира), затем окрашивают с помощью пигмента Романовского – Гимзе в течение 2-5 часов. После прокрашивания мазка его сушат при температуре 25-28 градусов и исследуют под микроскопом в иммерсионной среде (специальном иммерсионном масле, практически не преломляющем лучи света). В результате окраски по Романовскому – Гимзе возбудитель сифилиса приобретает розовый оттенок цвета, в то время как остальные спирохеты окрашиваются в синие и фиолетовые тона.
Способ Морозова (импрегнация трепонем серебром)
Пожалуй, один из наиболее быстрых методов микроскопической диагностики сифилиса. Для своего осуществления требует нескольких реактивов:
- первый – уксусная кислота (охлажденная), формалин 40% и 100 мл стерильной воды;
- второй – танин, сто мл карболовой кислоты и столько же дистиллированной воды;
- третий – сто мл раствора нитрата серебра в воде.
Импрегнацию трепонем серебром (серебрение по Морозову) проводят следующим образом: мазок высушивают, заливают первым реактивом на одну минуту, после чего предметное стекло промывают водой. Затем наступает очередь второго реактива – стекло при этом нагревают на 1 минуту в пламени спиртовки (умеренно). После промывания стекло вновь нагревают до окраски мазка в коричневый цвет. Затем снова следует тщательное отмывание, сушка и исследование в иммерсионной среде. Бледные трепонемы после серебрения по Морозову выглядят черными или темно-коричневыми неподвижными микробными телами. Все морфологические свойства их сохраняются в достаточной степени для достоверной идентификации.